精制魚(yú)油膽固醇測(cè)定在國(guó)標(biāo)GB 5009.128-2016的應(yīng)用與優(yōu)化「那艾」

魚(yú)油是油性魚(yú)類(lèi)組織中提取的油脂,內(nèi)含多種不飽和脂肪酸，具有預(yù)防冠心病、抑制血小板凝聚、舒張血管、調(diào)節(jié)血脂的作用，對(duì)心血管亞健康人群有益處l14]。但魚(yú)油中膽固醇含量較高,海洋魚(yú)油中的膽固醇含量更甚,而高膽固醇食物大量攝入易導(dǎo)致血液膽固醇含量升高，誘發(fā)一系列心血管疾病57]。因此，對(duì)魚(yú)油類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行膽固醇指標(biāo)監(jiān)控有重要的意義。

根據(jù)GB 5009.128-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中膽固醇的測(cè)定》8所述,膽固醇的測(cè)定有3個(gè)方法，分別是氣相色譜法、高效液相色譜法與比色法。魚(yú)油屬于動(dòng)物性食品,因此3種方法均適用?？紤]到比色法的測(cè)定原理為固醇類(lèi)化合物與酸作用產(chǎn)生i顏色物質(zhì)，當(dāng)樣品音膽國(guó)E大以外的固醇類(lèi)物質(zhì)時(shí)，同樣會(huì)發(fā)生顯色反應(yīng)，方法特異性較差，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏大l3。利用色諧效(傳是性強(qiáng)、液相色譜)進(jìn)行分析的方法,具有分隔雙E問(wèn)、符研名個(gè)業(yè)準(zhǔn)確度高、人為誤差帶入少等優(yōu)點(diǎn)，因而被較多企業(yè)與第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)選用，為目前主流的分析方法。但完全按照GB 5009.128-2016所述進(jìn)行測(cè)定，皂化加熱后冷卻放置的時(shí)間不同導(dǎo)致樣品回收率、含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rclativestandard deviation，RSD)大等問(wèn)題;批量處理樣品若采用電熱套進(jìn)行皂化加熱手段,需借助排插開(kāi)聯(lián)多個(gè)電潤(rùn)書(shū)同時(shí)加熱以縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間,存在安全用電隱患，不適當(dāng)?shù)臏y(cè)定方法出現(xiàn)專(zhuān)屬性不符合規(guī)定等問(wèn)題。本文針對(duì)在分析測(cè)定精制魚(yú)油膽固醇過(guò)程中遇到的問(wèn)題及探索出的解決方案進(jìn)行總結(jié),為日后精制魚(yú)油中膽固醇的分析工作提供經(jīng)驗(yàn)參考。

那艾-全自動(dòng)冷凝回流提取儀

皂化:精密稱(chēng)取魚(yú)油樣品0.25 g，于250 mL平底燒瓶中,加入30 mL無(wú)水乙醇,10 mL 60%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氫氧化鉀溶液,混勻。將試樣于100 °℃水浴皂化回流1 h，不時(shí)振蕩以防止試樣黏附在瓶壁上，皂化結(jié)束后,用5 mL無(wú)水乙醇自冷凝管頂端沖洗其內(nèi)部，取下燒瓶,室溫放置冷卻。

提取:定量轉(zhuǎn)移全部皂化液于250 mL分液漏斗中，用30 mL水，分3次沖洗圓底燒瓶，洗液并入分液漏斗，再用40 mL石油醚-乙醚混合液(1:1，體積比),分3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗。振搖2 min，靜置，分層。轉(zhuǎn)移水相,合并3次有機(jī)相,每次用100 mL水洗滌提取液至中性,初次水洗時(shí)輕輕旋搖。為防止乳化,提取液經(jīng)約10 g無(wú)水硫酸鈉脫水后轉(zhuǎn)移到250 mL圓底燒瓶中。

濃縮:將上述圓底燒瓶中的提取液于40℃旋蒸至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并定容至5 mL，得到樣品溶液。

本研究以GB5009.128-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中膽固醇含量測(cè)定》為參考依據(jù)，分別對(duì)測(cè)定方法、皂化加熱方式、皂化冷卻后放置時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化與考察，優(yōu)化過(guò)的條件經(jīng)過(guò)了定量限、線(xiàn)性、精密度、加標(biāo)回收率、穩(wěn)定性與系統(tǒng)耐用性的考察，證實(shí)該方法適用于精制魚(yú)油膽固醇的含量測(cè)定。